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Invitrogen核/膜系統(tǒng) 一、 實(shí)驗(yàn)原理： 酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄.另外實(shí)驗(yàn)詳情和步驟都做了闡述。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。 酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中建立 。典型的真核生物轉(zhuǎn)錄因子，高品質(zhì)昆明酵母雙雜交文庫實(shí)驗(yàn)外包,鄭州醫(yī)藥、保養(yǎng)， 如GAL4、GCN4、等都含有二個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域: DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-binding domain)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(transcription-activating domain)。前者可識(shí)別DNA上的特異序列， 并使轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域定位于所調(diào)節(jié)的基因的上游，西安淳風(fēng)生物科技有限公司,西安淳風(fēng)生物科技有限公司, 轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域可同轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的其他成分作用，昆明酵母雙雜交文庫實(shí)驗(yàn)外包,更實(shí)惠醫(yī)藥、保養(yǎng)，昆明酵母雙雜交文庫實(shí)驗(yàn)外包,專業(yè)定制醫(yī)藥、保養(yǎng)， 啟動(dòng)它所調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄。 二、實(shí)驗(yàn)步驟： 1.1 RNA提取 1.2 mRNA分離 1.3 cDNA初級(jí)文庫的構(gòu)建 1.3.1 cDNA一鏈的合成 1.3.2 cDNA第二鏈的合成 1.3.3 cDNA adapter的制備 1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份) 1.3.5 cDNA分級(jí)分離 1.3.6 BP重組 1.3.7 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B 1.3.8 文庫克隆檢測 1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定 1.4 cDNA次級(jí)文庫的構(gòu)建 1.4.1 初級(jí)文庫的質(zhì)粒抽提 1.4.2 LR重組 1.4.3 電轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B 1.4.4 文庫克隆檢測 1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定

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