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Invitrogen核/膜系統(tǒng) 一、 實驗原理： 酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內通過重建有活性轉錄因子的結構來鑒定蛋白質之間的相互作用。轉錄因子可以和DNA上特異的序列結合而啟動相應基因的轉錄.另外實驗詳情和步驟都做了闡述。這種DNA結合與轉錄激活的功能是由轉錄因子上兩個相互獨立的結構域即DNA結合結構域(Binding Domain, BD)和轉錄激活結構域(Activation Domain, AD)分別來完成的，杭州酵母雙雜交文庫技術服務,貴陽醫(yī)藥、保養(yǎng)實驗，并且這兩個結構域對于基因的轉錄激活都是必須的。 酵母雙雜交系統(tǒng)由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立 。典型的真核生物轉錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結構域: DNA結合結構域(DNA-binding domain)和轉錄激活結構域(transcription-activating domain)。前者可識別DNA上的特異序列，2019爆款杭州酵母雙雜交文庫技術服務,鄭州醫(yī)藥、保養(yǎng)， 并使轉錄激活結構域定位于所調節(jié)的基因的上游， 轉錄激活結構域可同轉錄復合體的其他成分作用，杭州酵母雙雜交文庫技術服務，西安淳風生物科技有限公司,西安淳風生物科技有限公司, 啟動它所調節(jié)的基因的轉錄。 二、實驗步驟： 1.1 RNA提取 1.2 mRNA分離 1.3 cDNA初級文庫的構建 1.3.1 cDNA一鏈的合成 1.3.2 cDNA第二鏈的合成 1.3.3 cDNA adapter的制備 1.3.4 cDNA與attB1重組接頭連接(三份接頭各連一份) 1.3.5 cDNA分級分離 1.3.6 BP重組 1.3.7 電轉化大腸桿菌DH10B 1.3.8 文庫克隆檢測 1.3.9 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定 1.4 cDNA次級文庫的構建 1.4.1 初級文庫的質粒抽提 1.4.2 LR重組 1.4.3 電轉化大腸桿菌DH10B 1.4.4 文庫克隆檢測 1.4.5 文庫庫容量、重組率、插入片段長度鑒定

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