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技術(shù)簡(jiǎn)介 Southern blotting是對(duì)基因組DNA特定序列進(jìn)行檢測(cè)的常用方法，首先提取基因組并利用限制性內(nèi)切酶消化DNA，在瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離，高品質(zhì)濟(jì)南Southern技術(shù)服務(wù),鄭州醫(yī)藥、保養(yǎng)，將DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，正宗濟(jì)南Southern技術(shù)服務(wù),西安醫(yī)藥、保養(yǎng)，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，西安淳風(fēng)生物科技有限公司,西安淳風(fēng)生物科技有限公司,從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。 技術(shù)原理： 具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補(bǔ)的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測(cè)方法的靈敏性，濟(jì)南Southern技術(shù)服務(wù),西安醫(yī)藥、保養(yǎng)公司，綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。 blot服務(wù)步驟如下： 1．探針的制備 PCR獲取檢測(cè)探針，標(biāo)記地高辛。 2．核酸樣品的制備 動(dòng)植物組織或細(xì)胞抽提出基因組DNA，并使用限制性內(nèi)切酶將其切斷成不同大小的片段。 3．瓊脂糖凝膠電泳分離酶切DNA樣品 電泳是將DNA樣品按片斷長(zhǎng)短進(jìn)行分離，然后進(jìn)行雜交，這樣可確定雜交靶分子的大小。 4．轉(zhuǎn)膜與固定 將凝膠中變性的單鏈DNA通過虹吸法轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的固相載體上，使用高溫烘烤的方法使DNA片段固定于膜上。 5．雜交與顯影 轉(zhuǎn)印后的濾膜經(jīng)過預(yù)雜交一段時(shí)間后，加入標(biāo)記的探針DNA進(jìn)行雜交反應(yīng)。雜交完成后使用酶底物對(duì)與標(biāo)記探針結(jié)合的酶聯(lián)抗體進(jìn)行顯色，烘干拍照。 您需要提供以下材料： 實(shí)驗(yàn)樣品： 用于抽提核酸和探針制備的材料：動(dòng)植物組織； 探針序列信息； 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考文獻(xiàn)：這將會(huì)幫助我們更好地理解您的實(shí)驗(yàn)背景，有利于實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。 您將獲得以下結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：酶切檢測(cè)跑膠圖片，southern雜交后的結(jié)果圖片； 實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物：探針引物及擴(kuò)增產(chǎn)物、雜交膜。雜交完成后使用酶底物對(duì)與標(biāo)記探針結(jié)合的酶聯(lián)抗體進(jìn)行顯色，烘干拍照。

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