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在獲得想要的DNA片段之后，使用合適的載體可以對(duì)這些片段進(jìn)行操作，實(shí)現(xiàn)想做的研究。目前，本公司有很多載體供大家進(jìn)行各類實(shí)驗(yàn)，一般情況下，大家只需要選擇并找到合適的載體就可以了。少數(shù)情況下，南昌載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn),鄭州醫(yī)藥、保養(yǎng)技術(shù)服務(wù)，可能會(huì)涉及到需要對(duì)載體進(jìn)行改造。 方法 通過(guò)酶切將DNA片段連入載體 實(shí)驗(yàn)原理 DNA連接酶可以催化相鄰DNA鏈的5‘磷酸基團(tuán)與3‘羥基形成磷酸二酯鍵，從而完成連接。常見(jiàn)的依賴限制性內(nèi)切酶的連接，是將載體和目標(biāo)DNA片段（外源片段）進(jìn)行相同方式的酶，查南昌載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn),專業(yè)載體構(gòu)建設(shè)計(jì)相關(guān)，產(chǎn)生可以互補(bǔ)配對(duì)的粘性末端，然后進(jìn)行連接。根據(jù)使用的酶數(shù)量，可以分成雙酶切、單酶切兩種類型。 人工構(gòu)建的質(zhì)?？梢约喾N有用的特征于一體，如含多種單一酶切位點(diǎn)、抗生素耐藥性等。常用的人工質(zhì)粒運(yùn)載體有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四環(huán)素基因(Tcr)和抗氨芐青霉素基因(Apr)，并含有5種內(nèi)切酶的單一切點(diǎn)。如果將DNA片段插入EcoRI切點(diǎn)，不會(huì)影響兩個(gè)抗生素基因的表達(dá)。但是如果將DNA片段插入到Hind Ⅲ、BamH Ⅰ 或 SalⅠ切點(diǎn)，就會(huì)使抗四環(huán)素基因失活。這時(shí)，我們推薦南昌載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn),專業(yè)載體構(gòu)建設(shè)計(jì)相關(guān)，含有DNA插入片段的pBR322將使宿主細(xì)菌抗氨芐青霉素，但對(duì)四環(huán)素敏感。沒(méi)有DNA插入片段的pBR322會(huì)使宿主細(xì)菌既抗氨芐青霉素又抗四環(huán)素，西安淳風(fēng)生物科技有限公司,西安淳風(fēng)生物科技有限公司,而沒(méi)有pBR322質(zhì)粒的細(xì)菌將對(duì)氨芐青霉素和四環(huán)素都敏感。pSC101與pBR322相似，只是沒(méi)有抗氨芐青霉素基因和PstI切點(diǎn)。質(zhì)粒運(yùn)載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千堿基對(duì))。

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單酶切（或者產(chǎn)生兩個(gè)平末端的雙酶切）由于載體產(chǎn)生的粘性末端可以發(fā)生自連，需要使用去磷酸化酶處理載體，消除其5‘磷酸基團(tuán)防止自身連接。而雙酶切一般不會(huì)產(chǎn)生可以自連的粘性末端，不需考慮這一問(wèn)題。 服務(wù)周期 10個(gè)工作日

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